1、生物技术制药陈做第一章 绪 论1生物技术的内容：基因、细胞、酶、发酵、生化、蛋白质、抗体、糖链工程和海洋生物技术2生物技术的应用 ：（1）医药（2）农业（3）食品（4）工业（5）环境净化（6）能源3传统生物技术阶段：（1）主要产品：乳酸、酒精、丙酮、丁醇、柠檬酸、淀粉酶 （2） 技术特点：过程简单，大多数属于兼气发酵或表面培养，生产设备要求不高，产品化学结构简单，属于初级代谢产物 4近代生物技术阶段 ：20世纪40年代，第二次世界大战的爆发，急需疗效好、毒副作用小的抗细菌感染药物，出现了青霉素，产量低，产品价格昂贵，随着发酵新技术的出现，又相继发现了链霉素、红霉素、金霉素等药物 主要产品：抗生
2、素、维生素、甾体、氨基酸；食品工业的工业酶制剂、食用氨基酸、酵母、啤酒；化工业的酒精、丙酮、丁醇、沼气；农林业的农药；环境保护业的生物治理污染技术特点：（1）产品类型多，初级（氨基酸、酶、有机酸）；次级（抗生素）；生物转化（甾体）（2）生物技术要求高，纯种、无菌、通气、产品质量要求也高（3）生产设备规模大，500立方米，2000立方米（4）技术发展速度快，青霉素，200单位每毫升，8万单位每毫升，形成了交叉学科生化工程 5现代生物技术 ：1953年，Watson和Crick提出了DNA的双螺旋结构模型，标志着现代生物技术阶段的开始，揭开了生命科学划时代的一页，此后，又相继出现了一系列新发现和新
3、进展，遗传中心法则，破译遗传密码，基因重组，单克隆抗体，DNA测序等（见表1-1） 该阶段产品种类很多，胰岛素、干扰素、生长激素等（表1-2）该阶段生物技术的内容包括：（1）重组DNA技术及其它转基因技术；（2）细胞和原生质体融合技术；（3）酶或细胞的固定化技术；（4）植物脱毒和快速繁殖技术；（5）动物细胞大量培养技术；（6）动物胚胎工程技术；（7）现代发酵技术（高密度发酵、连续发酵、新型发酵技术）；（8）现代生物反应工程和分离工程技术；（9）蛋白质工程技术；（10）海洋生物技术 6医药生物技术新进展 ：1.基础研究不断深入2.新产品不断出现 3.新试剂、新技术不断出现4.新型生物反应器和新分
4、离技术不断出现 7、我国医药生物技术现状：1.新型疫苗研制进展突出2.基因工程活性多肽药物研制进展较快3.抗体工程也取得多项成果4.利用基因工程技术制备新型抗生素5.利用酶工程技术研制出一批诊断试剂6.基因治疗方面进行了大量基础研究7.蛋白质工程研究方面8.在发酵工程技术方面的研究9.海洋生物技术方面10.生化工程方面11.动、植物细胞培养方面，取得了较好的成绩第二章生 物 药 物 概 论1天然的生物材料：人体、动植物、微生物和各种海洋生物随着生物技术的发展，有目的人工制得的生物原料成为当前生物制药原料的重要来源，如用基因工程技术制得的微生物或细胞 2生物药物的特性 ：（一）药理学特性1.治疗
5、的针对性强2.药理活性高3.毒副作用小、营养价值高4.生理副作用时有发生（二）生产、制备中的特殊性1.原料中的有效物质含量低2.稳定性差3.易腐败4.注射用药有特殊要求（三）检验上的特殊性3生物药物的分类 ：（一）按药物的化学结构和化学特性分类 ：优点：有利于比较一类药物的结构与功能的关系、分离制备方 法的特点和检验方法（1）氨基酸及其衍生物类药物（2）多肽和蛋白质类药物（3）酶和辅酶类药物（4）核酸及其降解物和衍生物类药物（5）糖类药物（6）脂类药物（7）细胞生长因子（8）生物制品类（二）按原料来源分类 ：优点：有利于对不同原料进行综合利用、开发研究 （1）人体组织来源（2）动物组织来源（3
6、）植物组织来源（4）微生物来源（5）海洋生物来源（三）按生理功能和用途分类 ：（1）治疗药物（2）预防药物（3）诊断药物（4）其它生化试剂、保健品、化妆品、食品、医用材料4原料选择原则：有效成分含量高原料新鲜原料来源丰富、易得原料中杂质含量少 产地较近，成本低5保鲜方法：冷冻法有机溶剂（如丙酮）脱水法防腐剂保鲜6常用破碎方法：（1）磨切法 机械破碎法（2）压力法 加压和减压（3）反复冻融法 （4）超声波震荡破碎法 （5）自溶法或酶解法 7.蛋白质类药物分离提取方法：沉淀法（盐析、有机溶剂、等电点）按分子大小分离（超滤、透析、层析、离心）按所带电荷不同分离（离子交换、层析、电泳、等电聚焦）亲和层
7、析法（酶与底物、抗原与抗体、激素与受8核酸类药物的分离提取方法：提取法：提取核酸与蛋白质的复合物解离分离DNA或RNA发酵法：用于生产核苷酸 9.糖类药物的分离纯化方法：沉淀法离子交换层析法10脂类药物的分离纯化方法：沉淀法吸附层析法离子交换层析11.氨基酸类药物的分离纯化方法：（1）氨基酸的生产蛋白质水解发酵法化学合成法酶促合成法（2）分离方法沉淀法吸附法离子交换法12人体来源药物的特点和研究意义 ：1.安全性好 不易产生副反应2.效价高、疗效可靠 ；质量好、效价高3.稳定性好 冻干制剂10度以下可保存2年以上。（二）研究意义1.资源的有限性2.对医学具有重大意义（弄清起作用机制）疗效优于传
8、统治疗3.从药学的角度进行研究，研究清楚这些药物的结构和功能，可帮助利用生物技术来制备新药 13血液成分制品：1.红细胞制剂：（1）代浆全血 （2）压积红细胞 （3）少含白细胞的压积红细胞 （4）冰冻储藏红细胞 2.白细胞浓缩液：（1）输注白细胞疗法（2）生产干扰素的重要原料 3.血小板制剂4.新鲜冰冻血浆（FFP）14血浆成分制品：1.传输蛋白类2.免疫球蛋白3.凝血系统蛋白4.补体系统蛋白5.蛋白酶抑制物类15动物来源药物的特点：1.具有生物药物的共性2.原料来源丰富3.安全性和有效性还有待进一步研究16动物多肽药物种类：1多肽激素：垂体多肽激素（ACTH、MSH、LPH、OT、AVP）下
9、丘脑激素（TRH、GRIF、LHRH）甲状腺激素（PTH、CT）胰岛激素（胰高血糖素、胰解痉多肽）胃肠道激素（胃泌素、CCK-PZ、肠泌素、VIP、GIP、缓激肽、P物质）胸腺激素（胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子）2多肽类细胞因子：此类药物大部分为多种物质的混合物；如脑氨肽、蛇毒、胎盘提取物、脾水解物、肝水解物、心脏激素、转移因子、抗癌肽等 17动物蛋白类药物种类：蛋白质激素（GH、PRL、TSH、LH、FSH、HCG等）血浆蛋白质：与人血浆蛋白质相似，但由于种族差异，不能直接用于人类蛋白质类细胞因子粘蛋白（胃膜素、硫酸糖肽、内在因子、血型物质）胶原蛋白（明胶、阿胶、氧化聚合明胶）其他：硫酸鱼精
10、蛋白、胰蛋白酶抑制剂 18动物酶与辅酶类药物种类：1动物酶类促消化酶类消炎酶类治疗心血管疾病抗肿瘤的酶与氧化还原电子传递有关的治疗酶其他药用酶（有机磷解毒酶、青霉素酶）2动物辅酶类药物：大多数属于核苷酸类药物 19动物核酸类药物1.组成：核酸由核苷酸组成、核苷酸、核苷、碱基及其衍生物2.作用：主要在癌症、肝炎、抗放射性、心脏病等方面有很好的治疗效果 3主要种类（1）DNA（2）RNA（3）辅酶A（4）ATP20动物糖类药物：单糖、寡糖、多糖。多糖以粘多糖为主，是一类胞外生物大分子物质，是动物体内蛋白多糖分子中的糖链部分，可抗凝血、降血脂、抗病毒、抗肿瘤和抗放射性分布：粘多糖（中性和酸性）、粘蛋
11、白、糖蛋白、糖脂等。粘多糖主要分布在动物骨、软骨、皮、角、血管、肠、滑膜液、脑、角膜、肺、肝、心、尿等原料中21动物脂类药物 ：1.性质：溶于氯仿、苯、石油醚等非极性溶剂，而不溶于或微溶于水中，可分为脂肪、类脂和衍生物，又可分为复合脂和简单脂 2.脂类药物的种类与分布种类：脂肪酸及其衍生物、磷脂类、胆酸类、卟啉和衍生物分布：主要为脂肪酸和磷脂，分布在脑、脊髓等神经组织中，脂肪组织、赶等含量也较丰富，胆酸分布在胆汁中，卟啉以血液为主3.特点：脂类药物的一个特点是，从生物组织中制得的药物再经过分子改造可以得到更高疗效的产品。脑磷脂可止血、防动脉硬化以及神经衰弱；卵磷脂防治动脉硬化、神经衰弱和肝病
12、4.制备方法：提取法水解法生物转化法化学合成或半合成 22植物来源药物的种类与用途 ：1.植物中的（小分子）天然有机化合物（1）种类：糖和糖苷类苯丙素类；醌类；黄酮类；鞣类；萜类；甾体；生物碱（2）用途：抗肿瘤药（喜树碱、秋水仙碱）强心药（洋地黄毒苷、地高辛）抗菌、消炎药抗凝血药镇痛药作用与神经抗疟药（盐酸奎宁、青蒿素）止咳平喘（盐酸可待因、茶碱）2.植物蛋白、多肽、酶类生理活性物质的种类与用途3.植物糖类药物（1）单糖类（2）聚糖类（3）糖的衍生物4.植物脂类药物（1）脂肪和脂肪酸类（2）磷脂类（3）固醇类23海洋生物及海洋生物药物的种类：1.海藻2.腔肠动物3.节肢动物4.软体动物5.棘皮
13、动物6.鱼类7.爬行动物8.海洋哺乳动物24我国发展海洋药物的主攻方向：（1）海洋生物活性物质的研筛选抗病毒、抗菌、抗肿瘤、抗爱滋病和防治心脑血管疾病等活性物质（2）大力促进海洋生物技术在开发海洋药物上的应用（3）开发新的海洋中成药和新剂型（4）充分利用海洋资源，开发海洋保健品（5）开发新的海洋医用生物材料 第三章 基因工程制药1基因工程药物的类型：免疫性蛋白细胞因子激素酶类2利用基因工程技术生产药物的优点 ：1.可大量生产（过去难以获得的）生理活性蛋白和多肽，以保障临床供应2.可提供足量的生理活性物质，以便进行深入研究，从而扩大这些物质的应用范围3.可以发现、挖掘出更多的内源性生理活性物质4
14、.可通过基因工程和蛋白质工程技术对内源生理活性物质的不足之处进行改造和去除5.可获得新型化合物，扩大药物筛选来源 3基因工程药物生产的主要程序：目的基因的分离与克隆（目的基因来源于人体或病原体）构建DNA重组体（通常将目的基因与质粒DNA整合，组建重组质粒）将DNA重组体转入宿主菌构建工程菌工程菌的发酵（在工程菌的发酵培养过程中，目的基因同时表达）外源基因表达产物的分离纯化（用生物技术及化学、化学方法）成品的检验 及包装等4制备基因工程药物的一般程序 ：目的基因组建重组质粒构建基因工程菌培养工程菌除菌过滤|产物分离纯化半成品检定成品检定包装 表达系统：原核生物系统和真核生物系统。 选择表达系统
15、主要考虑：保证表达的蛋白质的功能 其次是表达量的多少和分离纯化的难易5克隆真核基因常用的方法有逆转录法和化学合成法 6载体的分类（1）质粒DNA，如 PUC、PBR322等（2）噬菌体DNA，如 gt 10、 gt 11等7载体的特点： PUC和gt 11属于表达型载体，而PBR322和gt 10属于非表达型载体质粒载体容量小（只能插入小于10kb的cDNA 片段）；而要插入大于10kb的外源cDNA 片段时，只能选用噬菌体作为载体8cDNA与载体的连接：加同聚尾连接法加人工接头连接法9.目的cDNA克隆的分离纯化核酸探针杂交法免疫反应鉴定法10高效表达（1）目的产物产量高（表达产量 ，分离纯
16、化）（2）目的产物质量高（产物的稳定性，产物的生物学活性）11宿主细胞应满足以下要求：1.容易获得较高浓度的细胞2.能利用廉价易得的原料培养3.不致病、不产生内毒素4.发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态5.容易进行代谢调控6.容易进行DNA重组技术操作7.产物的产量、产率高，产物容易提取 12宿主细胞的分类 ：1.原核细胞：如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌2.真核细胞：如酵母菌、丝状真菌、哺乳动物细胞 13大肠杆菌特点：产物多为胞内产物（因为大肠杆菌的表达产物不存在信号肽）真核蛋白质常以不溶性包含体的形式存在（故下游处理过程必须经过复杂的变性和复性等工艺才能恢复其生理活性）蛋白质产物不
17、能糖基化（因为大肠杆菌的表达不存在翻译后修饰作用）目的蛋白的N-端常带有一个多余的Met残基，易引起免疫反应有时会产生很难除去的内毒素（阴性杆菌的细胞壁成分）有时会产生蛋白酶破坏目的蛋白14枯草芽孢杆菌特点：分泌能力强，可将蛋白质产物直接分泌到培养液中不形成包含体不能使蛋白质产物糖基化有很强的胞外蛋白酶，会对产物进行降解 15酵母特点：繁殖迅速基因工程操作简单（可以廉价地大规模培养，没有毒性）能将表达产物直接分泌到胞外表达产物能糖基化 16）丝状真菌（如霉菌）特点： 有很强的蛋白质分泌功能 能正确进行翻译后加工（包括肽剪切和糖基化等）糖基化方式与高等真核生物相似为无毒安全菌株 17大肠杆菌表达
18、载体应具备下列条件：载体能够独立复制应有灵活的克隆位点和方便的筛选标记应具有很强的启动子应具有阻遏子应具有很强的终止子所产生的mRNA必须具有翻译起始信号 18影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素（1）外源基因的拷贝数（1）外源基因的拷贝数：启动子的强弱在转录水平上直接影响基因的表达、核糖体结合位点的有效性、SD序列和起始ATG的间距、密码子的组成等都会不同程度地影响外源基因的表达 19融合蛋白优点：基因操作简便蛋白质在菌体内比较稳定蛋白质在菌体内稳定性好，不易被细菌酶类所降解容易实现高效表达缺点：不能作抗原使用（因为原核多肽序列可能会影响真核蛋白的免疫原性；目的蛋白需要回收 融合蛋白需要裂解和
19、进一步分离，才能获目的蛋白。在实际生产中，产品主要的成本往往就在该工段 ） 20非融合蛋白优点：能够较好地保持原来的蛋白活性；缺点：容易被蛋白酶破坏N-末端常常带有甲硫氨酸，在人体内用药时可能会引起免疫应 21分泌型蛋白特点：提高了易被细胞内蛋白酶降解的表达产物的稳定在细胞内表达时无活性的蛋白质，分泌表达时能按一定的方式 折 叠，形成具有活性的蛋白质分泌后的蛋白质产物不含起始密码所编码的Met（因为Met随着信号肽被信号肽酶切割掉了）22 真核基因在大肠杆菌中的表达形式（1）融合蛋白（2）非融合蛋白（3）分泌型 23酵母载体分类：普通表达载体和精确表达载体24外源基因在酵母中表达效率与启动子、
20、分泌信号、终止序列有关25宿主菌株的影响：不同的酵母菌株及其生理状态对外源基因的表达有明显影响， 用作表达的酵母宿主菌株应具备下列要求菌体生长力强 菌体内源蛋白酶较弱菌体性能稳定分泌能力强 26基因工程菌的稳定性分为分裂不稳定质粒结构不稳定27引起质粒不稳定的原因 ：1.对于含低拷贝质粒的工程菌，若工程菌的比生长速率较快，则容易产生不含质粒的子代菌2.含高拷贝质粒的工程菌产生不含质粒子代菌的频率较低，但是大量外源质 粒的存在使含质粒菌的生长速率明显低于不含质粒菌，而不含质粒菌一旦产生，能较快地取代含质粒菌而成为优势菌28提高质粒稳定性的方法 ：1.两阶段培养法2.选择性压力3.间歇供氧法4.改
21、变稀释速率法29如何实现工程菌的高密度培养和提高重组产物的表达水平：分批培养中选用不同的碳源补料培养中控制补料速度连续培养中控制稀释速率向培养基中补加甲硫氨酸和酵母提取物适当提高培养基的pH值，可减少乙酸的抑制作用30基因工程菌的培养方式：1.补料分批培养2.连续培养3.透析培养4.固定化培养31基因工程菌的发酵工艺设计的影响1.培养基的影响碳源有机氮源磷2.接种量的影响3.温度的影响4.溶解氧的影响5.诱导时机的影响6.pH的影响32.对发酵罐的特殊要求：能提供菌体生长的最适条件培养过程不得污染能够保证纯菌培养性质稳定，培养和消毒过程中不得游离出异物不能干扰细菌的代谢活动33发酵罐的组成 ：
22、罐体 搅拌装置 温控系统 灭菌系统 空气滤菌装置 残留气体处理装置 参数测量与控制装置 培养液配制及连续操作装置34基因工程药物制备的特点1.目的产物在初始物料中含量较低2.含目的产物在初始物料组成复杂3.目的产物为生物活性物质，稳定性差4.与目的产物共存的物质种类繁多5.产物应用面广，对其质量、纯度要求高（如无菌、无热源等34含目的产物的初始物料的特点：宿主的类型及代谢特性，如表达方式等培养基的组成生产工艺和条件，如灭菌方法、生产方式等初始物料的理化性质和生物学特性35 分离纯化的基本过程：1细胞破碎2 固液分离3浓缩与初步纯化4 高度纯化（得到纯品）5 成品加工36分离纯化技术应满足的要求
23、：技术条件要温和选择性好收率要高各种技术能直接衔接整个分离纯化过程要快37细胞破碎方法 ：（1）机械破碎法 ：高速匀浆法 超声破碎法 高速珠磨法 高压挤压法（2）非机械破碎法： 酶溶法 化学渗透法 热处理法 渗透压冲击法38色谱方法：1.离子交换层析2.反相色谱3.疏水色谱4.亲和层析5.凝胶过滤层析39 分离纯化工艺应遵循的原则：1.具有良好的稳定性和重复性2.尽可能减少工艺步骤3.组成工艺的各技术或步骤之间要能相互适应和协调，工艺与设备也能相互适应；从而减少步骤间对物料的处理和条件调整4.尽可能少用试剂5.分离纯化工艺时间尽可能短，以免影响产品的生物活性6.工艺和技术必须高效、高回收率、设
24、备条件低、易操作、能耗低7.工艺安全性好，保证产品安全、无菌、无热源、无污染40基因工程干扰素的制备 ：启开种子 制备种子液 发酵培养 粗提 半成品制备 半成品检定 成品包装 成品检定 冻干 分装第四章 抗 体 制 药1抗体产生机制： 抗原物质 （刺激） 机体免疫系统 （激活） B淋巴细胞 （分化、增殖）浆细胞（分泌） 球蛋白2单克隆抗体的特点：高度特异性；均一性；来源稳定；可大量生产3免疫方法：（1）体内免疫法（2）体外免疫法4(1)对骨髓瘤细胞的要求：融合率高 自身不分泌抗体所产生的杂交瘤细胞分泌抗体的能力强 杂交瘤细胞性质应长期稳定 5筛选阳性克隆常用方法：免疫酶技术、免疫荧光技术、放射
25、免疫技术6阳性克隆的克隆化常用方法有：有限稀释法和软琼脂法7单克隆抗体的大量制备主要方法 ：（1）体外培养法（2）体内诱生法8单克隆抗体分离 ：凝胶过滤阴离子交换层析亲和层析9抗体的结构基因组成：（1）可变区（V区）（2）恒定区（C区10人-鼠嵌合抗体.制备原理：由于抗体与抗原特异结合的功能取决于抗体分子的V区，而异种免疫原性 则决定于抗体分子的C区。将编码鼠源性McAb的V区基因和编码人Ig的C 区基因连接起来，再共转染骨髓瘤细胞，就可表达出完整的人-鼠嵌合抗 体（VH+VL）鼠（CH+CL）人11人-鼠嵌合抗体制备方法：提取杂交瘤细胞系的mRNA，经逆转录以cDNA作为模板，采用特异引物，
26、用PCR扩增VL和VH基因分别连接真核表达所需的上游启动子、前导肽和下游剪切信号将VL基因克隆到人Ig的CL基因表达载体上，VH基因克隆到人Ig的CH基因真核表达载体上将嵌合基因与质粒DNA等量混合，在脂质体介导下共转染骨髓瘤细胞在含霉酚酸的培养液中筛选，只有共转染细胞可生长繁殖，所分泌的 抗体即为人-鼠嵌合抗体12改形抗体（又称CDR移植抗体）1.制备原理：用鼠源性单克隆抗体的CDR区序列替换人Ig中的互补决定区序列，使人的Ig具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合2.制备方法3.抗体特性：具有鼠源性单克隆抗体与抗原结合的特异性；但抗体分子中 鼠源部分只占很小比例，可基本消除免疫原性13小分子抗体类
27、型 ：Fab片段抗体FV抗体单链抗体单域抗体最小识别单位14单链抗体的优点：可以去除许多造成非特异反应的竞争性表面蛋白，肿瘤显像的背景更清晰更容易渗透到肿瘤组织中去，增加有效药物浓度相对分子量小，所以鼠源性抗体的免疫原性小，能消除人抗鼠的排斥反应，延长其在人体内的半衰期15单链抗体在大肠杆菌中表达：非融合表达融合表达分泌表达16双功能抗体的优点：一个臂识别肿瘤细胞表面抗原，包括肿瘤相关抗原癌基因产物、特殊的白细胞分化抗原、病毒蛋白抗原、特异性受体等，并有效结合；另一个臂可识别免疫效应细胞及分子 17 构建方法：（1）化学交联法（2）生物学方法（杂种-杂交瘤法）（3）基因工程法18抗体融合蛋白常
28、见类型 ：配基 - 配基型融合蛋白配基 - Ig型嵌合蛋白配基 - FV嵌合蛋白受体FV型融合蛋白酶 - 抗体型融合蛋白（抗体酶）19抗体研究的沿革：多克隆抗体 单克隆抗体 以基因工程方法制备抗体 20噬菌体抗体库技术的基本方法：1.获取目的基因2.抗体库技术的载体：目前应用最多的是噬粒（质粒-噬菌体），它具有噬菌体和质粒的共同特点；转化效率高，抗体基因文库容量大3.淘筛4.表达与鉴定21噬菌体抗体库技术的特点：1.模拟天然全套抗体库2.避开了人工免疫和杂交瘤技术.可获得高亲和力的人源化抗体 22基因工程抗体的表达：1.原核生物 2.真核生物 3.转基因植物 4.转基因动物 23诊断血清的制备
29、：制备细菌抗原 免疫动物 制备抗体血清24（1）常用诊断血清的品种和用途：如：血液分型血清血型检测 沙门氏菌诊断血清肠道病原菌（如伤寒、副伤寒杆菌） 志贺氏菌诊断血清细菌性痢疾病原菌 大肠杆菌诊断血清大肠杆菌25妊娠诊断试剂测定方法：生物试验法、胶乳凝集试验法、酶联免疫吸附测定法、放射免疫测定法26免疫标记技术用的抗体类试剂（一）荧光抗体诊断试剂（二）放射免疫用抗体诊断试剂（三）免疫酶抗体诊断试剂（免疫酶染法和酶免疫测定法）27放射性核素标记的抗体治疗药物优点：操作简单、用量小，且能观察到药物在体内的分布和药物动力学，放射性标记的抗体有较大的杀伤范围，有利于克服肿瘤表面抗原的异质性，对肿瘤细胞
30、的杀伤也不依赖抗原抗体结合后的吸收作用， 由于分子量小，容易穿透到达肿瘤部位 缺点：有些放射性核素来源困难，且需放射性保护和污染处理28 .常用抗癌药 氨甲喋呤、阿霉素、丝裂霉素、环磷酰胺等29免疫毒素的制备（1）毒素来源：主要是细菌毒素和植物毒素（2）载体种类：小分子抗体FV和SCFV细胞生长因子可与细胞膜上的受体结合激素可识别细胞表面的受体CD4可识别HIV表达的糖蛋白。（3）制备方法：先克隆出细胞基因，再利用基因重组技术去除毒素中非特异性结合部位基因将经过改造的毒素基因再与载体基因的cDNA重组将重组体转入受体菌中表达，形成融合蛋白 纯化重组免疫毒素 第五章 动物细胞制药1动物细胞根据不
31、同的需要将离体培养的细胞分为两类：1贴壁依赖型（贴壁细胞）2贴壁非依赖型（悬浮细胞）3.兼性贴壁细胞2动物细胞生理特点：1.分裂期长2.细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象3.正常二倍体细胞的寿命有限4.动物细胞对周围环境十分敏感5.动物细胞对培养基要求很高6.动物细胞蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同 3动物细胞作为宿主生产药物的1优点：产物多半可分泌到细胞外，提取纯化方便，蛋白质经糖基化修饰后与天然产物更一致，适合于临床应用2缺点：培养周期长、条件要求高、成本高、产量低4生产用动物细胞的获得 ：1.原代细胞2.二倍体细胞3.转化细胞系5真核细胞基因表达载体的构建（1）病毒载体（2）质粒载体6动物细胞在体外培养所需条件1.所有与细胞接触的设备、器材和溶液都必须保持绝对无菌，避免污染2.必须有足够的营养供应，绝对不可有有害的物质，避免有害离子掺入3.保证有适量的氧气供应4.需随时清除细胞代谢中的有害产物5.有良好的适于生存的外界环境，如pH值、渗透压、离子浓度等6.及时分种，保持合适的细胞密度 7动物细胞的培养条件1.器材的清洗2.器材的消毒灭菌3.
