1、培养基模拟灌装试验验证方案样本 培养基模仿灌装实验验证方案(10ml)08月培养基模仿灌装实验验证方案(10ml)验证方案起草与审批验证小构成员部 门人 员职责粉针车间主任李海龙负责验证方案起草、组织、实行及培训。生产管理部刘明华负责验证方案审核和实行协调工作。设备部霍育生负责验证过程中设备设施正常运营。QA部宋新莉负责安排验证过程中监控和取样。QC部张华负责安排验证过程中物料、环境及样品检测。方案起草部门起草人日 期年 月 日验证委员会审视会签审核人职 务日 期年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日方案批准批准人批准日期年 月 日 10培养基培养和检查 141概述本次培养基模仿灌
2、装实验验证是以灭菌乳糖粉末分装到10ml西林瓶中，整个过程模仿正常粉针剂品种分装状态，在盖塞前将胰蛋白胨大豆肉汤培养基灌入瓶内，压塞轧盖后进行培养，确认无菌分装工艺无菌可靠性。2.验证目在各种干扰和最差条件下，评估灭菌工艺、人员更衣、行为习惯、A/B级气流模式、无菌环境建立、消毒维持办法和物料传递控制等整个流程无菌保证水平。3风险评估经验证小组人员共同对培养基模仿灌装实验验证进行风险评估，对存在质量风险提出了防止和纠正办法建议，详细见下表：风险因素风险影响既有控制办法也许性P严重性S检测性D风险优先数RPN风险级别建议采用办法人员未按更衣程序更衣及不规范动作。污染无菌环境，使产品受到污染按相应
3、SOP进行培训。人员进行更衣实验。34224中人员定期进行有关培训并进行更衣确认。分装线生产前检查及准 备灭菌设备故障，人员操作不当。所灭菌部件灭菌不彻底，污染产品设备通过验证且定期维护，人员培训。34224中人员进行有关设备操作培训。灭菌设备定期验证。无菌生产中正常干扰人员无菌操作不规范。无菌操作失败，使产品受到污染进入无菌生产区操作人员经培养基灌装实验确认。34448高人员无菌培训，人员经培养基灌装实验确认。A级区沉降菌采样无菌操作失败在A级区放置沉降碟操作平面低于产品操作平面，避免对产品影响。23318低取样人员进行有关SOP及无菌操作培训。原料进入A/B级区未按SOP规定清洁、消毒污染
4、无菌环境，间接污染到产品严格执行SOP人员培训33212低定期监测，加强监控环境环境未得到控制环境对产品产生污染检查有关验证状况，控制核心操作区人数，定期监测23318低定期监测，定期消毒。时限性设备、器具、环境未及时清洁、未拟定有效期微生物滋生，产品残留于设备中，导致交叉污染制定相应SOP，人员培训34336高SOP规定清洁时间、办法和有效期，人员培训到位。评估人 年 月 日4.验证参照原则4.1 药物生产质量管理规范（）4.2 药物生产质量管理规范（）指南4.3 中华人民共和国药典（二部） 4.4 药物生产验证指南（）5.验证范畴本方案合用粉针车间生产全过程。涉及：人员更衣、各房间清洁消毒
5、、物料传递、容器工具解决、内包材解决、中控取样、动态下环境监测、无菌分装、轧盖过程，并在分装过程中模仿正常与非正常干扰活动。方案中还规定瓶子、胶塞和铝盖灭菌后存储有效期 验证。6.验证职责6.1验证委员会6.1.1负责验证方案审批，质量副总进行批准。6.1.2负责验证协调工作，以保证本验证方案顺利实行。6.1.3负责验证数据及成果审核。6.1.4负责验证报告审批。6.1.5验证证书由验证委员会主任批准后，由质量管理部发放，验证文献由质量管理部归档保存。6.1.6负责再验证周期确认。6.2验证小组6.2.1负责验证方案起草和验证明行。6.2.2负责验证数据、记录及成果收集、整顿。6.2.3负责起
6、草验证报告，报验证委员会批准。6.3设备部6.3.1.负责组织所需仪器、设备验证。6.3.2负责设备维护保养。6.3.3.负责验证所需设备和HVAC系统、水系统及其她公用工程系统正常运营。6.3.4.负责生产辅助设施和公用工程系统操作和清洁。6.4质量管理部6.4.1负责验证方案审核。6.4.2负责生产过程监控和取样筹划制定。6.4.3负责取样及对样品检查并发放检查报告。6.4.4负责收集验证记录，并加以分析。6.5粉针车间6.5.1负责组织验证方案实行。6.5.2负责合理安排验证生产人员。7验证前提条件7.1验证中使用文献是最新版本并已生效(见下表)。文献名称文献编号验证总筹划管理规程SOP
7、-0101-ZL-02501确认与验证管理规程SOP-0101-ZL-01901人员进出生产车间管理规程SOP-02-SC-01401生产区卫生管理规程SOP-02-SC-00101无菌生产干净区人员行为规范原则操作规程SOP-02-SC-03700普通区物料传递岗位原则操作规程 SOP-0203-PS-00101灭菌岗位原则操作规程 SOP-0203-PS-00201DMH-百级净化双扉干热灭菌柜原则操作规程SOP-0203-E-00101XG1.D型机动门脉动真空灭菌器原则操作规程SOP-0203-E-00201洗瓶岗位原则操作规程SOP-0203-PS-00401KQCL60抗生素瓶立式
8、超声波清洗机原则操作规程SOP-0203-E-00301KSZ620/60型隧道式灭菌干燥机原则操作规程SOP-0203-E-00601胶塞清洗灭菌岗位原则操作规程 SOP-0203-PS-00501KJCS-10ES全自动湿法超声波胶塞清洗机原则操作规程SOP-0203-E-00501铝盖清洗灭菌岗位原则操作规程 SOP-0203-PS-00601KJSL-12ES全自动湿法铝盖清洗机原则操作规程SOP-0203-E-00401FILGUARD-212A型完整性测试仪操作规程SOP-0203-E-00201分装岗位原则操作规程 SOP-0203-PS-00701KFG300D型抗生素瓶螺杆分
9、装机原则操作规程SOP-0203-E-00701轧盖岗位原则操作规程 SOP-0203-PS-00801ZG300C型抗生素瓶轧盖机原则操作规程SOP-0203-E-00801中间产品传递岗位原则操作规程 SOP-0203-PS-00901灯检岗位原则操作规程SOP-0203-PS-01001表面微生物监测操作规程SOP-0102-T-047/00沉降菌监测操作规程SOP-0102-T-006/01浮游菌监测操作规程SOP-0102-T-005/01悬浮粒子监测操作规程SOP-0102-T-007/01培养基合用性检查原则操作规程SOP -0102-T-009/01干净区监测管理规程SOP-0
10、101-ZL-028/01偏差解决管理规程SOP-0101-ZL-016/01变更管理规程SOP-0101-ZL-017/017.2参加验证明行人员都已接受相应培训和本方案培训，并考核合格。7.3粉针车间干净空调净化系统、纯化水系统、注射用水系统、纯蒸汽系统、压缩空气、车间生产设备、称量衡器及培养室温度分布等已通过验证。7.4有关物料准备。名 称规格（编号）生产厂家胰蛋白胨大豆肉汤培养基250g瓶北京陆桥技术有限公司无菌乳糖200目广州天润药业有限公司注射用无菌粉末用卤化丁基橡胶塞 20-B2江阴兰陵瓶塞有限公司抗生素瓶用铝塑组合盖207.1烟台福山区誉兴制盖有限公司低硼硅管制注射剂瓶10ml
11、江苏潮华玻璃制品有限公司白色念珠菌98 001湖北省食品药物监督管理局检查研究院枯草芽孢杆菌63 501湖北省食品药物监督管理局检查研究院铜绿假单孢菌10 104湖北省食品药物监督管理局检查研究院金黄色葡萄球菌26 003湖北省食品药物监督管理局检查研究院大肠埃希菌64 941湖北省食品药物监督管理局检查研究院注：乳糖通过辐射灭菌。8验证批次和时间按本方案持续进行三批培养基模仿灌装，每批灌装数量不不大于5000瓶。序 号批 号模仿实验时间第1批0901第2批0902第3批09039验证环节9.1模仿灌装实验前确认9.1.1模仿灌装用无菌乳糖溶解性实验 称取模仿灌装用乳糖10g，于含胰蛋白胨大豆
12、肉汤培养基为3100ml溶液中，在2025温度条件下，经轻微地振摇应所有溶解。9.1.2模仿灌装用乳糖微生物生长性实验确认。9.1.3胰蛋白胨大豆肉汤培养基无菌实验确认。9.1. 4 胰蛋白胨大豆肉汤培养基敏捷度实验确认。9.2灌装前准备9.2.1培养基灌装实验生产操作流程培养基、乳糖内包材 相应传递间脱外包层流传递窗（铝塑盖、培养基、乳糖） （胶塞、管制瓶）物料暂存间瓶塞清洗间脱内包洗瓶 （乳糖） （胶塞清洗、灭菌） （瓶灭菌） （铝塑盖清洗、灭菌） 原料复核间瓶塞清洗间隧道烘箱铝塑盖清洗间（生产用品、分装机组件清洗、培养基配制） 原料搽消间器具清洗间（生产用品、分装机组件灭菌、培养基灭菌）
13、层流传递窗灭菌间 分装间（先分装乳糖，再灌装培养基）轧盖间制品传出9.2.2 工衣清洗灭菌，瓶子、胶塞、铝盖、分装机部件和器具按相应岗位SOP规定进行清洗灭菌后进入分装间。9.2.3培养基配制：培养基由操作人员按普通区物料传递岗位原则操作规程(SOP -0203-ps-001/01)传至器具清洗间，取胰蛋白胨大豆肉汤培养基5瓶（250g/瓶），提成两桶配制，先量取10000ml注射用水（约70）加入干净密封桶（65L），缓慢加入培养基1000g，搅拌10分钟，再量取15000ml注射用水（约70）加入密封桶中，再搅拌10分钟。取第二只干净密封桶（65L），先加入6700ml注射用水（约70），
14、缓慢加入培养基750g，搅拌10分钟，再量取10000ml注射用水（约70）搅拌10分钟。配制后培养基pH值应在7.30.2之间。将胰蛋白胨大豆肉汤培养基溶解完全稀释至浓度为30g/L溶液。按XG1.D脉动真空灭菌器原则操作规程(sop-0203-E-002/01)操作，121、20分钟灭菌后，传入分装间A级区。9.3模仿灌装过程9.3.1培养基冷却至室温后，按分装岗位原则操作规程(SOP -0203-ps-007/01)和KFG300D抗生素瓶螺杆分装机原则操作规程(SOP -0203-E-007/01)进行操作，将无菌乳糖按每支0.5g分装于10ml西林瓶中，按BT300-1F蠕动泵原则操
15、作规程(SOP -0203-E-010/01)进行操作，将灭菌胰蛋白胨大豆肉汤培养基按每支灌装7ml，扣好胶塞后按ZG300C型抗生素瓶轧盖机原则操作规程(SOP -0203-E-008/01)轧盖密封，在轧盖后缓冲间收集到不锈钢盘中（每个收集盘装载200支左右）。按分装时间对每个盛装培养基小瓶托盘编号，并记录每盘分装时间。9.3.2模仿最差生产条件：人数最多，时间最长。分装人数为8人，轧盖4人；为加大操作人员疲劳限度和考察对产品影响，模仿灌装超过工艺规程规定期限，时间为8小时，正常生产中午休息1小时。9.3.3培养基模仿灌装实验操作过程9.3.3.1 7：30至8：30装机。9.3.3.2
16、灌装量：每支西林瓶分装无菌乳糖0.5g，灌装培养基7ml。9.3.3.3 8：30装机后装原粉桶，按照分装岗位原则操作规程和BT300-1F蠕动泵原则操作规程调节装量0.5小时。9.3.3.4 9：00开始以支/小时速度分装无菌乳糖和灌装培养基30分钟。9.3.3.5 轧盖爆瓶停机15分钟。9.3.3.6 中间模仿运营1小时。9.3.3.7 以支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基30分钟。9.3.3.8 拆装原粉桶0.5小时。9.3.3.9 以支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基30分钟。9.3.3.10 12：15至13：15操作人员出来吃饭。9.3.3.11 模仿设备维修1小时，之后用消毒剂对分装
17、机台面上各部件进行擦拭10分钟，调节装量5分钟，自净15分钟，继续分装。9.3.3.12 以支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基30分钟。9.3.3.13 分装机拨瓶盘错位调节15分钟。9.3.3.14 模仿运营0.5小时。9.3.3.15 以3000支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基至结束。9.3.4 灌装培养基过程中进行各种正常干扰和非正常干扰模仿。9.3.4.1正常干扰因素序号因素次数详细实行1装机1分装机分装部件组装2胶塞转移3胶塞清洗机出料，转移至分装机旁隔离器内3装原粉桶，调装量2装原粉桶和换原粉桶4灌装速度4支/小时分装无菌乳糖和灌装培养基5灌装速度13000支/小时分装无菌乳糖和灌装
18、培养基6模仿运营21次1小时、1次0.5小时7装量检查10每次分装无菌乳糖和灌装培养基检查2次8解决胶塞轨道堵塞5每次分装无菌乳糖和灌装培养基解决一次9解决掉塞5每次分装无菌乳糖和灌装培养基解决一次10空瓶扶瓶5每次分装无菌乳糖和灌装培养基扶瓶一次11轧盖爆瓶1停机15分钟12中间休息1中午休息、吃饭13胶塞上料25每次分装无菌乳糖和灌装培养基上料5次14环境监测1分装过程中15分装机操作工穿越轨道8生产过程中分装机操作工穿越轨道次数为8次。16人员表面微生物2中午休息出去时、使用结束时9.3.4.1非正常干扰因素序号因素次数详细实行1出轨后倒瓶5每次分装无菌乳糖和灌装培养基倒瓶一次2设备维修
19、1第三次灌装结束后，停止灌装60分钟，打开分装机台面下控制箱，模仿检查维修。维修时间约60分钟，之后用消毒剂对分装机台面上各部件进行擦拭，调节装量，继续灌装3分装爆瓶1爆瓶，停机解决4拨瓶盘调节1挤瓶导致拨瓶盘错位9.4实验过程监测9.4.1西林瓶无菌检查及有效期验证西林瓶按KQCL60抗生素瓶立式超声波清洗机原则操作规程(SOP -0203-E-003/01)进行清洗，按KSZ620/60型隧道式灭菌干燥机原则操作规程(SOP -0203-E-006/01)进行灭菌后进入分装间。9.4.1.1测试办法：每次取6只西林瓶按直接接种法，其中3支放入300ml硫乙醇酸盐流体培养基中、3支放入300
20、ml改良马丁培养基中，同步做阴性对照，分别在23-28C和30-35C培养14天；逐日观测并记录。9.4.1.2.鉴定原则：所有样品和阴性对照管培养14天后液体澄清，不得有菌生长。9.4.1.3取样时间：实验前（9点取样，存储8h）、实验中（12点取样，存储6h）、实验后（16点取样，存储4h）。9.4.2.胶塞无菌检查及有效期验证胶塞按KJCS-10ES全自动湿法超声波胶塞清洗机原则操作规程(SOP -0203-E-005/01)清洗、灭菌后出料存储于分装间A级区。9.4.2.1.测试办法：每次取20只胶塞按直接接种法，其中10只放入100ml硫乙醇酸盐流体培养基中、10只放入100ml改良
21、马丁培养基中，同步做阴性对照，分别在23-28C和30-35C培养14天；逐日观测并记录。9.4.2.2.鉴定原则：所有样品和阴性对照管培养14天后液体澄清，不得有菌生长。9.4.2.3取样时间为：实验前（8点取样，存储36h）、实验中（11点取样，存储40h）、实验后（15点取样，存储44h）。9.4.3铝塑盖无菌检查及有效期验证铝塑盖按KJSL-12ES全自动湿法铝盖清洗机原则操作规程(SOP -0203-E-004/01)清洗、灭菌后出料存储于轧盖间A级区。9.4.3.1.测试办法：每次取20只铝塑盖按直接接种法，其中10支放入300ml硫乙醇酸盐流体培养基中、10支放入300ml改良马
22、丁培养基中，同步做阴性对照，分别在23-28C和30-35C培养14天；逐日观测并记录。9.4.3.2.鉴定原则：所有样品和阴性对照管培养14天后液体澄清，不得有菌生长。9.4.3.3取样时间为：实验前（8点半取样，存储36h）、实验中（11点半取样，存储40h）、实验后（15点半取样，存储44h）。9.4.4生产过程环境监测及表面微生物监测9.4.4.1测试办法：参见浮游菌测试原则操作规程（SOP-0102-T-005/01）、沉降菌测试原则操作规程（SOP-0102-T-006/01）、悬浮粒子测试原则操作规程（SOP-0102-T-007/01）、表面微生物监测原则操作规程（SOP-01
23、02-T-047/00）。9.4.4.2.鉴定原则9.4.4.2.1悬浮粒子干净度级别静态动态0.5um5.0um0.5um5.0umA级352020352020B级352029352900C级352900350290009.4.4.2.2微生物动态监测原则干净度级别浮游菌cfu/m3沉降菌cfu/4小时（90mm）表面微生物接触（55mm）cfu/碟5指手套cfu/手套A级1111B级10555C级1005025-9.4.4.3取样筹划及取样点取样点见下表。取样操作参见干净区监测管理规程（SOP-0101-ZL-028/01）。 分装流程图：进瓶转盘（解决倒瓶） 分装（上料、装量检查、添加胶
24、塞、卡瓶、堵塞、停机维修、人员进出、环境监测） 轧盖（添加铝塑盖、堵盖、环境监测）风险因素取样位置级别监测项目取样办法取样频率1.人员操作及数量、着装更换。2.装量检查。3.物料转运操作。 4.各种无菌操作。人员五指手套、手肘、胸部、腹部、头部、口罩、护目镜A/B级表面微生物55mm接触碟半途更衣前实验结束后进瓶转盘A级悬浮粒子沉降菌浮游菌粒子传感器90mm平皿浮游菌采集器在线监测实时监控实验结束后分装头A级悬浮粒子沉降菌浮游菌粒子传感器90mm平皿浮游菌采集器在线监测实时监控实验结束后胶塞振荡器A级悬浮粒子沉降菌浮游菌粒子传感器90mm平皿浮游菌采集器在线监测实时监控实验结束后分装机隔离器表
25、面、隔离器手套A级表面微生物55mm接触碟实验结束后分装间墙面、门把手、地面B级表面微生物55mm接触碟实验结束后轧盖机操作台面A级悬浮粒子沉降菌浮游菌粒子传感器90mm平皿浮游菌采集器在线监测实时监控实验结束后轧盖机隔离器表面、隔离器手套A级表面微生物55mm接触碟实验结束后轧盖间墙面、地面B级表面微生物55mm接触碟实验结束后10.实验样品培养和检查10.1将实验正常样品和不良样品先置2328培养7天，再置3035培养7天，培养时一半正立，另一半倒置，第7天后互换；第7天观测培养基灌装品微生物生长状况，并对污染瓶中微生物进行总结其特点。若发现污染应明确记录样品灌装时间及数量，若有破损状况应
26、记录并检查其破损因素。对于微生物污染样品应进行鉴别实验。10.2如果培养基灌装产品存在污染，将污染瓶中污染菌在营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基上划线和分离培养，挑取单个菌落形态进行形态学观测、革兰染色等初步鉴别。11.实验成果评价11.1样品可接受原则11.1.1所有样品均进行培养，所有样品无浑浊浮现，则为阴性，合格。11.1.2若有1支浮现浑浊现象需进行调查，并记录污染产生因素。11.1.3有2支污染则视为验证失败。需进行调查，填写异常状况报告，依照调查所拟定或也许发生因素制定纠正或改进方案并实行，在调查结束并采用相应办法后重复进行无菌模仿分装实验。11.1.4 浮现阳性样品应进行密封性检
27、查，剔除所有渗漏样品。11.1.5物料平衡记录培养基灌装记录物料平衡某些应涉及完整数据记录和对该批丢弃数量描述。此外，依照无菌灌装验证详细状况，采用分灌装瓶数进行物料平衡计算。合格原则为100。11.2最后判断原则：11.2.1无菌灌装验证鉴定为合格必要满足如下三条：所有样品均为阴性（无浑浊现象）样品促生长实验合格（均有浑浊）物料平衡成果符合规定（为100）11.2.2如果其中任何一项不合格则表白无菌模仿灌装实验不合格。12.验证成果分析验证小组负责对验证数据、记录及验证成果收集、整顿，做验证总结，涉及对验证过程审核：12.1 验证明验与否有漏掉。12.2 验证明行过程中对验证方案有无修改，修
28、改因素、根据以及与否通过批准。12.3 验证记录与否符合原则规定。12.4 验证明验成果与否符合原则规定，偏差及对偏差阐明与否合理，与否需要进一步补充实验。13风险评估与接受通过对培养基模仿灌装实验成果分析和判断，对核心性风险和非核心性风险所采用初步风险控制办法进行评估，确认风险与否降至为可接受风险。14验证成果评审和结论验证委员会负责对验证成果进行综合评审，做出验证结论，验证委员会主任批准后由质量管理部发放验证证书，确认再验证周期。对验证成果评审应涉及：(1) 验证明验与否有漏掉？验证记录与否完整？(2) 验证过程中验证方案有无修改？修改因素、根据以及与否通过批准？(3) 验证明验成果与否符合原则规定？偏差
