1、畜牧专业本科专业技能训练实验室操作技能动物科学专业基本技能项目内容第一章 实验室操作技能一、精液品质检查（一）精子活率、密度检查，理化因素对精子的影响实验目的掌握检查精子活率、密度的方法；熟悉感官检查精液品质的方法；验证观察理化因素对精子运动及生存性能的影响。实验材料1. 精液 羊新鲜精液2. 药品器械 显微镜、载、盖玻片、搪瓷盘、温度计、滴管、擦镜纸、纱布、蒸馏水、3%和0.9%氯化钠溶液、2%煤酚皂溶液、1/1000新洁尔灭溶液、75%酒精。实验内容1. 精液的感官检查 记入下表2. 精子密度检查及活率评分(1)查精子的密度 取1小滴精液滴在载玻片上，加上盖玻片，使精液分散成均匀一薄层，不
2、得存气泡，也不能使精液外流或溢于盖玻片上，置于显微镜下放大400-600倍观察。密在整个视野中精子密度很大，彼此之间空隙很小，看不清楚各个精子运动的活动情况。中精子之间的空隙明显，精子彼此之间的距离约有一个精子的长度，有些精子的活动情况可以清楚地看到。稀精子分散于视野内，精子之间的距离超过一个精子的长度。(2)评定精子的活率 必须于采精后立刻在22-26度的实验室内进行。精子活动有三种类型，即直线前进运动、旋转运动和振摆运动。评价精子活率是根据直线前进运动精子数的多少而定的。 精子活率 =呈直线运动精子数 / 总精子数 100%十级制100%为1.0级，90%为0.9级，依次类推。种公畜精液品
3、质检查登记表畜别畜号采精时间（年月日）射精量色泽气味云雾状密度活率1ml白色无味+注：云雾状显著以“+”表示，有云雾状以“+”表示，云雾状不明显以“+”表示。理化因素对精子的影响记入下表理化因素对精子活率影响记载表处理前活率评分处理后活率评分35-37度0.740-45度0.80-5度0.235-37度0.6加入不同浓度溶液前0.7加入1%NaCI溶液0.1加入3%NaCI溶液0加入蒸馏水0加入药液前0.7加入2%煤酚皂溶液0加入1/3000新洁尔灭溶液0加入75%酒精0（二）精子数量计算和畸形率的测定实验目的掌握测定每毫升精液中所含精子数的方法，以及测定精子畸形率的操作要点。实验材料1.材料
4、 羊的新鲜精液及冷冻精液。2.器械 显微镜、载玻片、盖玻片、红细胞稀释管、血细胞记数板、5ml试管、1ml及2ml吸管、玻棒、染色缸、玻片镊、纱布。3.药品 龙胆紫、酒精、甲醛、实验内容1.精子数量测定 血细胞计算板测定法(1)清洗器械 血细胞计数板及盖玻片用蒸馏水冲洗，使其自然干燥。血细胞稀释管-蒸馏水冲洗-95%酒精清洗-乙醚清洗。(2)精液的稀释 用红细胞稀释管准确吸取精液至刻度0.5或1处，再准确吸取3%NaCl至101处。（0.5-200倍，1-100倍）用纱布擦去管尖端复着的精液，用拇指按住管口，震荡2-3分钟使其均匀。(3)精子计数 将擦洗干净的计数板置于显微镜载物台上，在计算室
5、上盖上盖玻片。将稀释好的精液，滴一滴于计算室上盖玻片的边缘，使精液自动渗入计算室。注意不要使精液溢出于盖玻片之外，也不可因精液不足而致计算室内有气泡或干燥之处。静置3分钟以400-600倍显微镜检查。统计出计算室的四角及中央共5个中方格即80个小方格内的精子数。统计每个小格子内的精子，只数小格子内及压在左线和上线的精子。由5个中方格（80个小方格）所统计的精子数（X）代入下列公式即得出每毫升的精子数。X/80 400 10 稀释倍数 1000 = 每毫升精液所含精子数1.测定精子畸形率(1)以细玻棒蘸取精液1滴，滴于载玻片一端。以另一载玻片的顶端呈35度角，抵于精液滴上，向另一端拉去，将精液均
6、匀涂抹于载玻片上。于空气中干燥。(2)固定染色 用0.5%龙胆紫酒精溶液染色3分钟，水洗、侯干即可镜检，也可用蓝墨水染色。(3)镜检 将制好的抹片置于显微镜下，查数不同视野的500个精子，计算出其中所含的畸形精子数，求出畸形精子百分率。二、精液冷冻实验目的精液冷冻是一种重要的繁殖技术，要求能基本掌握冷冻精液的制作技术。实验材料1.材料 新鲜牛精液2.药品 蔗糖、葡萄糖、柠檬酸钠、甘油、鸡蛋、青霉素、链霉素。3.仪器 液氮罐 、液氮、水浴锅、量杯、滴管、试管。实验内容牛精液冷冻1.配制稀释液 液取12%蔗糖8ml和卵黄2ml，青霉素、链霉素各1万单位；液取液9.3ml加0.7ml。2.稀释和冷却
7、 取活率为0.8的新鲜牛精液，用等温的液作1：1-2倍稀释，将精液包以10-12层纱布，放入2-5度的冰箱中，1小时后，待精液温度降至2-5度时，再以同温度的第液做等量稀释，以维持甘油的最终浓度为3.5%恒定不变。稀释总倍数应根据精子活率和耐冻性而调整，以保证每头份冷冻精液在解冻后有1000万个以上直线前进运动的精子。3.平衡 在2-5度温度下，稀释精液静置2-4小时。4.冷冻 颗粒冷冻精液用一金属容器盛满液氮。用一铜纱网作为冷冻板固定在具液氮面1-2cm处，待温度恒定后，用滴管将平衡后的精液滴在冷冻板上。每个颗粒体积为0.1ml。当冷冻板上的精液颗粒由黄色转为发白有光泽，轻拨易脱离冷冻板即可
8、收集起来，分装并做标记。5.保存 置于液氮中。6.解冻 取1-1.5ml2.9%柠檬酸钠解冻液，放入小试管中，40度水浴2-3分钟后，投入精液颗粒，待溶化1/2-1/3时，取出精液试管，当精液全部溶化后，检查评定精子活率。7.注意事项 (1)器械清洗及消毒、采精、精液处理、输精均应严格遵守人工授精操作规程。(2)在精液稀释、平衡、冷冻及解冻后，必须保持所要求的温度，严防在操作过程中温度出现回升和回降。三、动物超数排卵、同期发情及胚胎移植实验实验目的1.通过设计使用外源生殖激素对雌性动物进行处理，达到超数排卵和同期发情的实验效果。2.设计并实施胚胎移植手术，进行胚胎鉴定，掌握手术方法和胚胎鉴定技
9、术。实验器材及药品1.实验动物：公、母兔（鼠）若干只。2.同期发情及超数排卵：（1）器材：1ml注射器、5ml注射器、各种常规器材 （2）试剂：FSH、HCG、PMSG、LRHA2促排卵2号、GTH 垂体促性腺激素 、0.9%盐水、酒精棉3.冲胚及移植：（1）器材：小动物解剖台、1ml注射器、5ml注射器、剪毛剪一把、创巾布、酒精灯一个、手术刀、外科剪、止血钳、灭菌巾、药棉、镊子（大、小各一）、子宫钳一把、缝合线、缝合针、持针器一把、平皿、实体显微镜一台、捡卵针、冲胚管、动脉夹一把、钝性7号针头、温度计、水浴锅、培养箱、洗瓶。（2）试剂：碘酒棉、酒精棉、0.1%新洁尔灭、异戊已巴比妥钠、0.9
10、%生理盐水、油剂青霉素、链霉素。（3）配制冲卵液、培养液的药品实验方法1.采用激素的方法促使供体动物超数排卵学生：设计并实施促使实验动物超数排卵的方案。参考方案：供体母兔的超排处理 采用FSH和LH两种激素，按以下方案进行处理。时间药物剂量方法配种第一天上午FSH5 IU皮下注射下午FSH5 IU第二天上午FSH5 IU皮下注射下午FSH5 IU第三天上午FSH5 IU皮下注射试情下午FSH5 IU第四天上午LH（HCG）100 IU（40IU）静脉注射配种下午第七天上午下午手术采胚2.受体动物的同期发情处理学生：设计并实施诱导实验动物同期发情的方案。参考方案：受体母兔的同期发情处理在给供体母
11、兔作超派处理的第四天给受体母兔皮下注射LH 100 IU 或HCG 40 IU，同时刺激母兔阴道以诱发同期排卵。次日作为受体接受胚胎移植。3.胚胎移植手术 学生：设计手术方案 参考方案：（1）胚胎的回收将超排处理过的母兔空腹24小时以上，然后将母兔呈仰卧姿势保定在小动物手术台上，用0.25%普鲁卡因56ml或40 mg/kg体重的异戊巴比绥钠作静脉注射进行局部或全身麻醉。用消毒过的剪毛剪将手术部位剪毛消毒，自腹中线下1/3 处用手术刀片切开腹腔，作34cm切口，然后牵引出两侧子宫、输卵管及卵巢。观察卵巢状况，记录好黄体数。以含1020%的犊牛血清的PBSS缓冲液作冲卵液。回收胚胎时先在子宫大弯
12、初，避开血管，插入自制的带有乳胶管的回收针并摆动针头以确认针头进入子宫腔内，再用拇指夹住固定作为胚胎冲出时的通道。用自制的小型动脉夹夹注输卵管与子宫的交界处，并在此插入7号针头，接10ml 注射器，注入过滤过的37冲卵液58ml，胚胎经乳胶管冲出，将其收集于集卵皿内。冲胚完毕后将生殖器官复位，腹膜和腹肌作连续缝合，皮膜作结节缝合。在皮肤缝合前撒青霉素消炎，缝合完毕后在伤口周围涂抹碘酒。术后头5天每天皮下注射青链霉素各20万IU。（2）胚胎的鉴定将有收集液的培养皿置于实体显微镜下，检查回收胚胎的数目，观察胚胎的发育情况，并以形态学方法鉴别胚胎的质量。一般未受精卵呈圆球形，外周可见发亮的透明带，中
13、央为质地均匀色暗的细胞质，透明带和卵黄之间空隙很小甚至看不到。而早期胚胎形态呈圆球形，透明带平坦而均匀无破损，边缘整齐，形态清晰，卵裂球大小相等且致密，颜色一致，卵周隙明显。（3）胚胎移植受体兔的胚胎移植手术要求与过程大致同供体兔，但受体要求与供体发情时间一致（不超过24小时）为好。将检验合格的可用胚胎用1ml注射器或自制移卵器移植到有排卵侧的生殖道内，并注意胚胎移植部位应与供体冲卵部位相吻合。实验结果 移植成功率总结报告1.实验动物的选择对实验结果的影响参考：实验动物的年龄、体重、健康状况、生殖系统、饲喂、生活环境等。2.实验药物的选择参考：所选药物的效果、用药量的差别、药物的出产厂家的差别
14、、还是否有别的替代方案。3.冲卵液、培养液的配制 参考：药品的选择要求、配制操作的要求、保存及使用的要求。4.手术的过程 参考：（1）手术准备：消毒、灭菌、器械选择。（2）手术实施方案（部位、方法等）的理由。（3）胚胎鉴定标准、捡胚、移胚的方法及注意事项。5.胚胎鉴定 参考：鉴定标准、观察到的胚胎形态、操作过程中的注意事项。6.实验结果分析参考：（1）移植成功率高或低的原因：实验过程中哪些步骤做的好，哪些不好。（2）如不成功重新做后，有无进步，总结前后两次实验经验。四、染色体制备技术(一)小鼠骨髓细胞染色体标本的制备实验原理骨髓细胞具有丰富的细胞质和高度的分裂活性，真核体骨髓细胞的增殖是采取有
15、丝分裂的形式，即细胞染色体复制一次，分裂一次，子细胞染色体数目与母细胞相同。无需使用有丝分裂的诱导物，另外，在处理样品时，也不需要无菌操作，时间短，所用设备简单，易于推广应用。本实验以小鼠骨髓细胞为实验材料，掌握小鼠骨髓细胞染色体标本的制作方法，观察小鼠骨髓细胞染色体数目及形态特征。实验仪器、试剂小鼠、吸管、注射器、天平、解剖器、滴管、10ml离心管、离心机、冰、染缸、恒温水浴锅、显微镜、显微照相设备、载玻片、表面皿。0.1%秋水仙素、2% 柠檬酸钠、0.075mol/L KCl、Carony氏固定液（3：1的甲醇：冰醋酸）、PH6.8 Giemsa、试剂配制（1）、PH6.8磷酸缓冲液：Na
16、2HPO4.2H2O 2.96g，KH2PO4 2.25g溶于500ml蒸馏水中。（2）、5%Giemsa染液：用PH 6.8磷酸缓冲液以10：1稀释Giemsa母液成5%Giemsa染液。（3）、0.1%mol/L HCl：吸取0.365ml浓HCl 徐徐加入99.635ml蒸馏水中。（4）、0.4g/100ml秋水仙素：以0.85%生理盐水100ml溶0.4g秋水仙素。（5）、0.075mol/L KCl： 2.95gKCl溶于500ml蒸馏水中。方法及步骤（1）、秋水仙素处理：取小鼠骨髓前3-4小时，于小鼠腹腔注入0.04%秋水仙素，每10g体重注射0.1ml。（2）、取骨髓细胞：用断脊
17、髓法处死动物，剥离后肢剪开肌肉取其股骨，剔除其上的残余肌肉，剪去两端少许股骨头，用注射器吸取2%柠檬酸钠 5ml，然后将针头刺入股骨一端对准离心管中反复冲洗直至骨髓腔变白为止。（3）、制备细胞悬液：冲洗完毕后用吸管反复吹打冲洗液，使骨髓细胞游离于溶液中，弃大块组织团，制成细胞悬液。（4）、收集细胞：1500r/min离心10min弃上清（留一点），其沉淀物即是处于减数分裂过程中的各期细胞。（5）、低渗：加0.075mol/L KCl 5ml于离心管中，立即将沉淀物吹散打匀，使细胞悬浮于离心管溶液中（摇匀），置于37水浴低渗处理20min。（6）、固定：低渗处理后的细胞以1500r/min离心1
18、0min，弃上清以后，沿管壁加入新配制的甲醇-冰醋酸固定液（3：1）4ml，立即将细胞团吹散打匀，置室温固定20min，即第一次固定。按上述条件离心，弃上清，再加入4ml固定液，室温固定20分钟即第二次固定。（7）、制片：1500r/min离心10min，弃上清，再加固定液0.2-0.5ml，用滴管轻轻吹打均匀后，在-20冰箱中放置数小时的冰冷载玻片上方约30cm处迅速进行滴片，每片滴2滴细胞悬液,用嘴吹散后在室温下干燥或置37烤片仪上烘干。（8）、染色：用PH6.8 Giemsa染液扣染30min，自来水缓慢冲洗，空气干燥镜检。显微镜照像，放大。（二） 植物(牧草)染色体标本的制备与观察实验
19、目的学习植物染色体标本的制备技术，掌握染色体的计数方法，了解染色体的生物学意义。实验用品和试剂配制 大麦、黑麦草或其他禾本科牧草种子，Carnoy固定液、0.1%秋水仙素、1mol/LHCL、Schiff试剂、亚硫酸水溶液（漂洗液）、混合酶液（纤维素酶、果胶酶各1%-2%）、Carbor fuchsin（卡宝品红）染液。配制方法：配方：原液A：称取3g碱性品红，溶于100ml70%酒精中（此液可无限期保存）。原液B：取10ml原液A，加入90ml15%石碳酸（苯酚）水溶液（两周内使用）。染色液：55ml原液B加6ml冰醋酸和6ml37%甲醛（此液适用于植物原生质体培养中细胞核和核分裂的染色）。
20、配方：取配方中的染色液210ml，加9098ml 45%醋酸和1.8g山梨醇（此液适用于核和染色体的一般形态观察，具有广泛的适用性）。实验方法与步骤（1）、取材：将大麦、黑麦或小麦种子培养在培养皿内的湿滤纸上，室温或28下发芽，待胚胎长达12cm时，切取0.5cm长的根尖部分。（2）、预处理：将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中，室温下处理34h。也可把根尖浸入小烧杯内的自来水中，杯内加冰两小块，置04冰箱内处理24h左右。（3）、固定：取出根尖，投入Carnoy液中固定224h，换入70%酒精，暂时保存。（4）、水解：把根尖投入预热的58601mol/L热HCl中，恒温条件下水解1415mi
21、n。（5）、染色：倒去热HCl，滴加Schiff（无色品红）少许，染色0.51h（也可在冰箱内染色1224h）。（6）、漂洗：吸去Schiff试剂，用漂洗液换洗23次，每次12min。（7）、酶解：在载玻片上切取根尖着色深的部分，浸入小烧杯内12滴混合酶液中，室温下酶解40min左右或在28温箱中酶解20min左右。（8）、洗涤：吸去酶液，加蒸馏水，用吸管换洗几次，除去残留酶液后加入45%醋酸。（9）、压片：用吸管从醋酸中吸取材料，置干净载玻片上，材料周围保留半滴45%醋酸，盖上盖玻片，其上放一片吸水纸。左手指压住吸水纸的左边，右手指从吸水纸的左端向右方轻轻抹去，再用铅笔擦头从盖片上轻轻敲打，
22、使细胞均匀散开。（10）、镜检：把压好的片子放显微镜下，先观察细胞分散状况和中期分裂相的多少，再检查分裂中期细胞中的染色体是否完全散开。如若染色体分散不好而难以分辨和计数，可取下片子，平放桌面上，用手指隔着吸水纸在盖玻片上稍施压力。如果操作细心，用力适度，便可很容易得到染色体分散良好的压片标本，供观察，计数和照相用。（11）、封存：压好的片子如果来不及观察或照相，必须进行暂时封存。封存时先在盖玻片四周各放麦粒大石蜡一块，然后用烧热的解剖针迅速熔化石蜡，使盖片四周严密封闭。封好的片子可放培养皿内湿滤纸上的火柴支架上，盖上培养皿，可放冰箱内保存23天。Schiff试剂染色效果不够理想的材料，可于水
23、解后改用Carbor fuchsin染色（510min）。由于Carbor fuchsin具有染色快、着色深以及适用于广等特点，因此多数植物的根尖、幼芽、花药以及培养的细胞或愈伤组织，经Carbor fuchsin染色，都能得到良好的结果。五、畜禽血液蛋白多态的遗传分析实验目的了解遗传标记的原理与方法，掌握血液蛋白电泳技术与操作过程，学习遗传标记谱带的辨认和基因频率和基因型频率的计算、单个座位基因纯合度和杂合度、平均杂合度、有效等位基因数等群体遗传参数的计算，另外对遗传标记与相关生产性状的相关分析有所了解。实验内容1. 畜禽血液蛋白样品处理及凝胶制做（学生自己设计）根据不同处理样品选做不同的凝
24、胶，主要有（1）不连续聚丙烯酰胺凝胶（血液中血清白蛋白（Alb）、血清蛋白酶抑制物-1（Pi-I）、蛋白酶抑制物-2（Pi-II）、后白蛋白-1（Po-I）、后白蛋白-2（Po-II）、转铁蛋白（Tf）、后转铁蛋白（Ptf）、后白蛋白（Po）用不同浓度的分离胶和浓缩胶。（2）SDS聚丙烯酰胺凝胶（可直接进行多态分析）2. 电泳及蛋白谱带分析3. 遗传标记的群体遗传参数分析4. 遗传标记与某些生产性状的相关分析实验注意事项及说明1、所有需要配制的试剂都必须用容量瓶准确定容，凝胶缓冲液的PH要准确，否则电泳的效果将受到影响。2、配制试剂所需的水，最好是超纯水，一般使用的蒸馏水效果不是太好，因为本地
25、水质较硬，蒸馏水的PH一般都小于7。3、培植试剂中有些药品有一定毒性，如丙烯酰胺，因此在配制时切不可用手接触该药品，另外，实验所使用的染料，如氨基黑10B、考马斯亮兰等是蛋白质染料，最好不要和身体接触，否则染到皮肤上很难去除。4、凝胶染色、脱色等操作时手上一定要带上一次性手套，操作时手上动作要慢，有些凝胶很薄，很容易损坏。5、电泳时，在同一浓度凝胶上一定要保持恒定的电压或电流，不要随意改变电压或电流。6、电泳结束后，剥离凝胶要小心用水冲下，不要直接用手剥。7、辨认谱带要仔细，要用同一标准、多个人观察，最后确定电泳出现的谱带，并由带实验教师确认后，再开始计算基因型及后续分析。操作程序（一）不连续
26、聚丙烯酰胺电泳分析1、实验仪器、试剂准备（教师准备）（1）、仪器： 手提式保温箱；DYY-1型电泳仪；ZP-200振荡器；TGL-16B型台式离心机；BS200S电子天平；电泳槽；微量进样器（2）、试剂：三羟甲基氨基甲烷(Tris)；丙烯酰胺；甲叉双丙烯酰胺；甲醇；N,N,N,N,-四甲基乙二胺(TEMED)；过硫酸铵；考马斯亮兰R250；溴酚蓝；盐酸；甘氨酸；冰醋酸；无水乙醇；氨基黑10B；三氯乙酸。 2、实验步骤（学生操作）（1）、血样采集：实验动物的颈静脉采血，每只实验动物采血约2毫升静置于室温，待血清完全析出后分离备用。（2）、胶板的制备： 先将一块2002003（mm）.玻璃板的三边
27、均匀的涂上凡士林，距玻璃板边缘大约0.5厘米，放上塑料胶条，用凡士林封上塑料胶条之间的缝隙，再在塑料胶条的中部涂上凡士林压上另一块2001703（mm）.玻璃板，用夹子夹好固定在架子上。将配好的分离胶缓冲液，缓缓到入两玻璃板之间，防止气泡产生，倒后加水封口，30-60分钟后到去水，再将配好的浓缩胶缓冲液缓缓到入，插上梳子，大约30分钟后，去掉夹子抽掉底部的胶条，用滤纸擦掉凡士林。将制好的凝胶板，装入电解槽中，倒入电极缓冲液，拔取梳子，点样。（3）、试剂配制：10%过硫酸铵溶液：称取1克过硫酸铵粉末，用蒸馏水定容到10毫升。3mol/LTris-HCL缓冲溶液（PH=8.9）：称取Tris碱36
28、.6克加入1mol/LHCL48mL，后用1NHCL调PH至8.9，定容到100毫升。0.1236mol/LTris-HCL缓冲液（.PH=6.7）：Tris碱5.98克加入1mol/LHCL48ml，后用1NHCL调PH=6.7定容到100毫升。电极缓冲液：称6.0克Tris碱和28.8克甘氨酸，用1NHCL调PH8.3定容到1000毫升。30%丙烯酰胺溶液：称29.2克丙烯酰胺，0.8克双丙烯酰胺加蒸馏水定容到100毫升。12.5%三氯乙酸溶液：称取三氯乙酸固体62.5克，定容到500毫升。转铁蛋白（Tf），后白蛋白（Po）、后转铁蛋白（Ptf）、白蛋白（Alb）的染色液用5%氨基黑10B
29、 染色。染色液：按0.1%的比例将氨基黑10B溶于脱色液中，称取氨基黑10B1克溶于少量的蒸馏水中，后定容到1000毫升，染色20分钟。脱色液：无离子水：甲醇：冰醋酸=5：5：1即无离子水500毫升，甲醇500毫升，冰醋酸100毫升。至脱色液脱色为清晰谱带。血清蛋白酶抑制物（Pi-I，Pi-II）与后白蛋白（Po-I，Po-II），这四个蛋白座位可一次定型。将电泳后的凝胶用12.5%的三氯乙酸固定5分钟，然后用考马斯亮兰进行普通蛋白染色，染色液和脱色液的配方如下：染色液：考马斯亮兰R250 1.25g，冰醋酸48毫升，甲醇227毫升，蒸馏水225毫升，染色时间20-30分钟。脱色液：冰醋酸70
30、毫升，无水乙醇150毫升，蒸馏水780毫升，脱色时间以无蛋白带处的背景颜色褪尽为止。（4）、电泳测定采用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳分析测定血清白蛋白（Alb）、血清蛋白酶抑制物-1（Pi-I）、蛋白酶抑制物-2（Pi-II）、后白蛋白-1（Po-I）、后白蛋白-2（Po-II）、转铁蛋白（Tf）、后转铁蛋白（Ptf）、后白蛋白（Po）8个蛋白座位的多态性，蛋白座位采用不连续的聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，凝胶制备、缓冲液组成及有关电泳条件详见表1、表2。表1 血液蛋白座位电泳条件电泳条件蛋白座位Pi-IPi-IIPo-IPo-IITfPtfPoAlb分离胶浓度%14%7.5%浓缩胶浓度%4%3%分离胶缓冲液Tris-HCLPH8.9浓缩胶缓冲液Tris-HCLPH6.7电极缓冲液Tris-甘氨酸PH8.3说明部分点样后电流维持20毫安，样品进入分离胶后升至30毫安。表2 聚丙烯酰胺试剂配制 （单位：毫升）试剂3%4%7.5%14%30
